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尺寸排阻色譜柱在使用時(shí)有什么技巧呢?

更新時(shí)間:2024-06-13瀏覽:183次
  尺寸排阻色譜柱是一種基于分子尺寸差異進(jìn)行分離的高效色譜柱?;诙嗫仔阅z作為固定相,利用分子在凝膠孔道中的排阻效應進(jìn)行分離。在色譜柱中,大分子不能滲透到凝膠孔穴中去而被排阻,較早地流出色譜柱;中等體積的分子部分滲透;小分子則能夠完q滲透入凝膠孔道內,最后流出色譜柱。因此,樣品分子基本按其分子大小先后流出,從而達到分離的目的。
  尺寸排阻色譜柱的使用技巧:
  1、色譜柱的選擇與準備
  選擇正確的色譜柱:根據待測樣品的性質(zhì)和分子量范圍選擇合適的色譜柱。例如,對于分子量較大的樣品,應選擇具有較大排阻極限的柱子。
  色譜柱的儲存與維護:在不使用時(shí)應將色譜柱存放在適當的有機溶劑中,如甲醇或乙醇,以防止微生物生長(cháng)和色譜柱干裂。
  2、樣品的準備
  樣品溶解性:確保樣品完q溶解在流動(dòng)相中,避免樣品在柱上沉淀或聚集。
  過(guò)濾與脫氣:樣品溶液應通過(guò)0.22微米或更小的濾膜過(guò)濾,并徹d脫氣,以防止氣泡影響色譜分析。
  3、流動(dòng)相的選擇與優(yōu)化
  流動(dòng)相組成:選擇與樣品化學(xué)性質(zhì)兼容的流動(dòng)相,常用的流動(dòng)相包括水、鹽溶液或有機溶劑等。
  流動(dòng)相流速:調整適宜的流速,通常流速的增加可以縮短分析時(shí)間,但過(guò)高的流速可能引起柱效降低。
  4、系統的溫度控制
  恒定溫度:保持色譜系統在恒定的溫度下運行,溫度波動(dòng)可能會(huì )影響色譜峰的形狀和分離度。
  5、檢測器的正確設置
  選擇合適的檢測器:常用的檢測器有折射率檢測器和紫外吸收檢測器。選擇時(shí)應考慮樣品的化學(xué)性質(zhì)和檢測靈敏度需求。
  檢測器靈敏度:適當調節檢測器的靈敏度,以獲得清晰可辨的色譜峰而不至于過(guò)載。
  6、數據分析與處理
  校準曲線(xiàn)的建立:使用一組已知分子量的標樣來(lái)建立校準曲線(xiàn),這對于準確測定未知樣品的分子量至關(guān)重要。
  數據處理軟件:利用專(zhuān)業(yè)的數據處理軟件進(jìn)行數據收集和分析,可以有效提高數據處理的準確性和效率。
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