層析柱的使用方法

層析柱是凝膠層析技術(shù)中的主體，一般用玻璃管或有機玻璃管。凝膠過濾層析是利用一定大小孔隙的具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠作層析介質(zhì)(如葡聚糖凝膠、瓊脂 糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等)，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小、形狀不同擴散到凝膠孔隙內(nèi)的速度不同，因而通過層析柱的快慢不同而分離的一種層析法。下面來介紹一下層析柱的使用方法。

 

1.填裝之前，檢查層析柱各接頭、部件不能有破損漏氣，并將層析柱清洗干凈，壁上不要有殘留小顆粒，會影響層析效果。

2.確保填料、層析柱、所有的緩沖液以及樣品溫度一致，溫度不一致容易導(dǎo)致產(chǎn)生氣泡。

3.所有過柱子的液體（包括水、平衡緩沖液、洗脫緩沖液、再生溶液）用0.45um濾膜抽濾，并進行超聲脫氣，注意填料不可超聲脫氣。

4.將填料用純水清洗幾遍，洗掉保存液，并將上層的細(xì)小顆粒棄去。

5.關(guān)閉層析柱出水口，玻璃棒引流往層析柱內(nèi)倒入約1/4柱體積的水（或緩沖液），務(wù)必使底端無氣泡。

6.將填料用玻璃棒攪勻成懸漿，用玻璃棒引流，均勻的一次性倒入柱子內(nèi)，注意務(wù)必不要產(chǎn)生氣泡，待柱子內(nèi)填料穩(wěn)定，打開出液管，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降。

7.如果是手動操作，將柱子用純水沖幾個柱體積，使柱床穩(wěn)定。

如果儀器操作，用逐漸加大流速的方法，將填料壓實，注意：既不能過松，也不能過緊，要注意不能超過填料的耐壓。

8.上樣前，樣品要進行離心或者用0.45um濾膜過濾。