液相色譜柱的使用

隨著社會(huì)發(fā)展，HPLC也越來(lái)普遍。而液相色譜柱就是篩選分析方法開發(fā)的*步，色譜柱也是HPLC分析方法的核心。關(guān)于液相色譜柱的使用步驟和注意事項(xiàng)下面做簡(jiǎn)單介紹。

液相色譜柱的使用：

1、樣品的前處理
　　a、使用流動(dòng)相溶解樣品。
　　b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
　　c、使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。

2、流動(dòng)相的配制
　　液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：
　　a、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中（或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中）。
　　b、流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)c、流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果;降低柱壓降，延長(zhǎng)泵的使用壽命（可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度）。
　　d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。
　　e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。
　　f、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

3、流動(dòng)相流速的選擇
　　因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求*柱效，使用*流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。
　　當(dāng)選用*流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間（如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量）。
　　注意：
　　a.含水流動(dòng)相在實(shí)驗(yàn)前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過(guò)夜。加入*，防止細(xì)菌生長(zhǎng)。
　　b.流動(dòng)相要求使用0.45μm濾膜過(guò)濾，除去微粒雜質(zhì)。
　　c.使用HPLC級(jí)溶劑配制流動(dòng)相，使用合適的流動(dòng)相可延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，提高柱性能。